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DST是高碘酸盐可切割的同双功能交联剂，含有胺反应性N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)酯基团。DST通常用于将放射性标记的配体结合到细胞表面的受体上。DST必须先溶于有机溶剂如DMSO或DMF中，然后加入到水相反应混合物中。DST是亲脂性的，膜可渗透的，并且不具有带电基团，这使其能够用于细胞内和膜内蛋白质的共轭作用。

Sulfo-DST是包含sulfo-NHS酯的DST类似物。带负电荷的磺酸盐基团提供了足够的亲水性，使试剂能够直接溶于水相中，无需先溶解在有机溶剂中再加入到交联反应中。交联条件与DST相同。

NHS酯能够与多肽N末端和赖氨酸(K)残基侧链上的氨基(-NH2)反应，在pH7～9缓冲液中有效进行，形成稳定的酰胺键并释放N-羟基琥珀酰亚胺。但是NHS酯的水解是一个竞争反应，速度随pH的增加而加快。在稀释的蛋白质溶液中易发生水解，浓缩的蛋白质溶液更有利于酰化反应。

英文名称	DiSulfo Succinimidyl Tartarate
分子量	548.32
纯度	＞95% on TLC
间隔臂	6.4 Å
反应基团	NHS ester - homobifunctional cleavable
结构式

• Sulfo-DST对湿度敏感。为了避免产品中的水分冷凝，开瓶前必须先平衡至室温。
  
• 使用前立即准备Sulfo-DST交联剂。NHS-酯部分易水解并变得无活性，因此不要制备用于储存的储备溶液，实验前配制，弃掉所有重构交联剂。
  
• 使用pH7～9的非胺反应缓冲液，如20mM磷酸钠，150mM氯化钠的PBS，20mM HEPES，100mM碳酸盐/碳酸氢盐，50mM硼酸盐。避免使用含有胺(如Tris和甘氨酸)的缓冲液，因为胺对反应有竞争性。
  
• Sulfo-DST中心顺式二醇，可以用15mM偏高碘酸钠裂解。Tris(1M Tris，pH7.5)，甘氨酸或赖氨酸可用于淬灭NHS-酯反应，也可以通过透析或凝胶过滤除去未反应的交联剂。

• 交联蛋白的方法
  
  • 在反应缓冲液中制备蛋白质。如果蛋白质溶液含有Tris或甘氨酸，则需要在反应缓冲液中进行深度透析去除。
    
  • 向蛋白质样品中加入交联剂，如果蛋白质浓度大于5mg/mL，则使用10倍摩尔过量的交联剂。若小于5mg/mL的样品，使用20～50倍摩尔过量的交联剂。建议使用的交联剂终浓度为0.25～5mM。将Sulfo-DST溶于水中(10～20mM，或直接将Sulfo-DST粉末溶于反应缓冲液中)。在最终反应中尽可能使用最少量的溶剂(1～10%)，减少对蛋白质的不利影响。
    
  • 将反应混合物在室温下孵育30分钟或在冰上孵育2小时。
    
  • 如需要淬灭反应，加入终浓度为20～50mM Tris(pH7.5)，在室温下孵育15分钟，然后可以通过透析或凝胶过滤去未反应的交联剂。
• 细胞内交联的方法
  
  • 交联可以在悬浮细胞或培养板中的贴壁细胞上进行。但对于贴壁细胞，交联剂向细胞的所有表面扩散会受到限制，并且交联反应将主要发生在暴露的细胞表面上。
    
  • 磷酸盐缓冲液(PBS)：20mM磷酸钠，0.15M NaCl。或使用pH7～9的HEPES，碳酸氢盐/碳酸盐/硼酸盐缓冲液替代。
    
  • 在PBS中以约25×10⁶个细胞/ml悬浮细胞。
    
  • 用预冷的PBS洗涤细胞三次以除去含胺的培养基和蛋白质。对于细胞表面相互作用研究，向细胞中加入配体并在4℃下孵育1小时。
    
  • 使用前立即将DST溶于DMSO中(10～25mM)。加入DST溶液至终浓度为1～5mM。
    
  • 室温下孵育30min。在4℃下进行孵育可能会降低DST的活性内化。
    
  • 用终浓度为20～50mM的Tris(pH7.5)淬灭反应，并在室温下孵育15分钟。